Nalgene耗材主要特點:
1、簡單的裝置可實現每分鐘1℃的降溫,可大大的提高細胞的存活率
2、用之前在盒夾層內裝入100%異丙醇
3、凍存1℃凍存容器,“梯度降溫盒”,聚碳酸酯;藍色高密度聚乙烯蓋;白色高密度聚乙烯管槽;泡沫襯墊
4、直徑×高度:120×86mm, 適用于1.0-2.0ml凍存管
Nalgene耗材使用時注意事項:
細胞凍存有兩種方法:傳統的方法是利用冷存管處于4℃、 -20℃、 -80℃保存,程序降溫方法是利用程序降溫盒設定程序由室溫降低至-80℃,zui后再放置到液氮槽中長期保存。程序降溫盒的使用注意事項如下:
經驗1:凍存盒外表面有刻度的吧,異丙醇液面要高于zui底線。4 a. C* D8 Y& P9 A, y
凍存盒肯定是先放在室溫,然后放進去細胞,置于-80,利用異丙醇實現梯度降溫啊。)
根據論壇里的討論,異丙醇使用過一段時間后是要更換的,但是我一直沒換過,也沒發現很大問題。
經驗2:我們實驗室凍存盒平時放4度,需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉移至液氮,貴重的細胞盡快轉移,不然會影響復蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的,很方便,效果也不錯的。
經驗3:異丙醇的量是要保證的,不能低于表明的線,否則不能起到很好的程序性降溫作用,我們是在4度放置,放了細胞后立馬放到-80度冰箱,第二天再轉移到液氮,效果很不錯。異丙醇熔點:-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性:口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數據:眼睛- 兔子100 毫克/ !請注意清理!
經驗4:應該不可以把凍存盒放4°的,因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右,所以從-80℃拿出來的凍存盒應該現在室溫靜置一段時間待其恢復到室溫再使用。而其中的異丙醇應使用6~7此后更換一次,而且保證液體量達到刻度線,否則降溫效果會受到影響。
經驗5:凍存盒里的異丙醇一般是250ml,低于刻度了要加上,理論上是5次以后更換異丙醇,但是異丙醇對環境有害,我們可以多用幾次,只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對細胞有毒性,尤其是室溫的時候,所以凍存盒和凍存液先放4°,等把細胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里,還放回4°,等到出細胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉入液氮。
程序降溫盒這個梯度降溫可大大提高細胞凍存的存活率,由于程序降溫盒內存在100%濃度的異丙醇和泡沫內襯,因此程序降溫盒也可以用于細胞復蘇。